干細(xì)胞培養(yǎng)基是專門設(shè)計(jì)用于體外培養(yǎng)干細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì),通過(guò)提供適宜的環(huán)境和關(guān)鍵成分,維持干細(xì)胞的自我更新能力、未分化狀態(tài)及多向分化潛能。
干細(xì)胞培養(yǎng)基的操作要點(diǎn):
培養(yǎng)基配制
解凍與混合:無(wú)血清營(yíng)養(yǎng)添加物需室溫或2-8℃解凍,避免反復(fù)凍融;按比例加入基礎(chǔ)培養(yǎng)基后混合均勻。
儲(chǔ)存條件:配制后的培養(yǎng)基2-8℃避光保存,穩(wěn)定期通常為2-3周。
細(xì)胞培養(yǎng)操作
基質(zhì)膠包被:貼壁培養(yǎng)需用基質(zhì)膠預(yù)處理培養(yǎng)板,促進(jìn)細(xì)胞粘附。
細(xì)胞接種與觀察:接種后置于37℃、5% CO?培養(yǎng)箱,定期觀察細(xì)胞形態(tài)及密度。
換液與傳代:每24小時(shí)換液一次,避免活性成分耗盡;傳代時(shí)控制消化時(shí)間,防止細(xì)胞損傷。
質(zhì)量控制
無(wú)菌檢測(cè):每批培養(yǎng)基需通過(guò)細(xì)菌、真菌、支原體、內(nèi)毒素檢測(cè)。
性能驗(yàn)證:通過(guò)干細(xì)胞生長(zhǎng)曲線實(shí)驗(yàn),確認(rèn)培養(yǎng)基能維持和擴(kuò)增未分化干細(xì)胞。